Non è molto difficile, basta fare, prima dell'inserimento dell'e-mail, un controllo dove viene letto il file e ricercato quell'indirizzo e-mail. Aggiungi:
Codice PHP:
$mail file_get_contents($filename);
if (
strpos($mail,$testo))
  echo 
"E-mail già registrata";
else {
  
$handle fopen($filename'a+');
  
fwrite($handle$testo);
  
fclose($handle);

Così sono sicuro che il tuo problema sia risolto!