le parentesi quadre sono C#, qui è VB.

Comunque dovrebbe funzionare cosi' (tieni presente che non ho provato):
codice:
Protected Sub Page_Load(ByVal sender As Object, ByVal e As EventArgs) Handles Me.Load

Dim Table As Data.DataTable = New Data.DataTable
Table.Columns.Add(New DataColumn("Nome", GetType(String)))
Table.Columns.Add(New DataColumn("Cognome", GetType(String)))
Table.Columns.Add(New DataColumn("Numero", GetType(String)))

Table.Rows.Add(New Object() {"Mario", "Rossi", "1"})
Table.Rows.Add(New Object() {"Manuel", "Rossi", "2"})
Table.Rows.Add(New Object() {"Vito", "Rossi", "3"})

GridView1.DataSource = Table
GridView1.DataBind()

End Sub
'(Anche se è il modo sbagliato di fare un bind, che va separato in un metodino a parte)



Protected Sub Button1_Click(sender As Object, e As EventArgs) Handles Button1.Click
    GridView1.Columns(0).ItemStyle.Width = 100
    GridView1.Columns(0).ItemStyle.Wrap = False
End Sub

oppure semplicemente definendo le colonne del Gridview e dando loro una larghezza:

codice:
...
<Columns>
 <asp:BoundField DataField="Nome" HeaderText="Nome" ItemStyle-Width="50" />
 <asp:BoundField DataField="Cognome" HeaderText="Cognome" ItemStyle-Width="70" />
 <asp:BoundField DataField="Numero" HeaderText="Numero" ItemStyle-Width="30" />
</Columns>